研究分担者 冨永 和宏 研究者番号: 4 九州歯科大学・歯学部・助教授 西原 達次 研究者番号: 8 九州歯科大学・歯学部・教授 辻澤 利行 研究者番号: 6 九州歯科大学・歯学部・助手 この研究課題のドキュメント 2005年 採択課題 研究実績報告書 2006年 採択課題 研究実績報告書 研究成果報告書概要 研究成果報告書概要(欧文) 研究課題基本情報(最新年度) 研究期間 2005年度~2006年度 研究分野 外科系歯学 審査区分 一般 研究種目 基盤研究(B) 研究機関 九州歯科大学 配分額 総額:14400千円 2006年度:6400千円 (直接経費:6400千円) 2005年度:8000千円 (直接経費:8000千円) 研究概要 ... もっと見る
研究分担者 冨永 和宏 研究者番号: 4 九州歯科大学・歯学部・助教授 西原 達次 研究者番号: 8 九州歯科大学・歯学部・教授 辻澤 利行 研究者番号: 6 九州歯科大学・歯学部・助手 この研究課題のドキュメント 2005年 採択課題 研究実績報告書 2006年 採択課題 研究実績報告書 研究成果報告書概要 研究成果報告書概要(欧文) 研究課題基本情報(最新年度) 研究期間 2005年度~2006年度 研究分野 外科系歯学 審査区分 一般 研究種目 基盤研究(B) 研究機関 九州歯科大学 配分額 総額:14400千円 2006年度:6400千円 (直接経費:6400千円) 2005年度:8000千円 (直接経費:8000千円) 研究概要(最新報告) 近年、さまざまな先天性疾患や、悪性腫瘍を対象に遺伝子治療の研究が進みつつある。我々の研究グループは、マイクロバブルと超音波照射を併用したソノポレーション法を口腔癌治療に応用できないか検討した。今回、in vitroおよびin vivoの実験系でソノポレーション法を用い、ヒト歯肉扁平上皮癌細胞(Ca9-22 cell)内に数種類の物質を導入し、致死活性の発現を調べた。 まず、超音波発振装置(ソニトロン2000)を用い、β-galactosidase発現プラスミドをCa9-22 cellに導入し、導入効率を検討したところ、周波数1.0MHz、超音波強度2.0W/cm^2、DUTY比10%、照射時間20秒で最大の効果が認められ、マイクロバブルを併用することにより導入効率が約250倍増強した。 次に、in vitroの実験系で、Ca9-22 cellにBleomycin(BLM)および細胞毒素関連遺伝子(pVIVO1-cdtB)を導入したところ、強い致死活性の発現が認められた。Flow cytometry、Hoechst染色により細胞の状態を観察したところ、BLMを導入した群ではsub-G1期の細胞数の増加、Annexin-V/PI陽性細胞数の増加が観察された。また、BLMおよびpVIVO1-cdtBを導入した群ではHoechst染色にて細胞死を示す核の断片化が著明に認められた。 さらに、ヌードマウスの背部にCa9-22 cellを移植して担がんマウスを作製し、同装置を用いて担がんマウスの癌組織にBLMおよびpVIVO1-cdtBを導入し、抗腫瘍効果を検討したところ、BLMおよびpVIVO1-cdtBを導入した群では処置後4週目で明らかな抗腫瘍効果が認められた。また同組織から切片標本を作製しTUNEL染色、caspase-3を認識する抗体による免疫染色を行い、病理組織学的に評価したところ、導入群の腫瘍細胞にTUNEL陽性細胞、caspase-3陽性細胞が認められた。 以上の結果から、ソノポレーション法は口腔癌治療における薬剤・遺伝子デリバリーシステムの1つとして有効であり、安全で治療効果が高い癌治療法としての可能性が示唆された。 Recently, ultrasound-targeting microbubble destruction has been employed in molecular gene therapy, and a new potent nonviral gene transfer method known as 'sonoporation' has been developed. We investigated the efficiency of sonoporation toward growth inhibition of human gingival squamous carcinoma cell line, Ca9-22, in vitro and in vivo. The cytotoxicity of bleomycin (BLM) was investigated using flow-cytometric analysis and Hoechst's staining in vitro assay systems. We found that the delivery of BLM by sonoporation induced cytotoxic effect toward Ca9-22 cells in vitro. Our in vivo results showed that tumors nearly disappeared in Ca9-22 cell-implanted nude KSN/slc mice treated with a low dose of BLM followed by sonoporation during the 4-week experimental period. Histological analysis revealed that the cytotoxic effect was mainly apoptosis. We previously reported that the cytolethal distending toxin B (cdtB) from Actinobacillus actinomycetemcomitans, a periodontopathic bacterium, is responsible for cell cycle arrest and apoptosis in vitro. Thus, we used sonoporation to transfect a cdtB-expressing plasmid into Ca9-22 cells and examined cell viability in vitro and in vivo. We found that an administration of cdtB-expressing plasmid followed by sonoporation-induced marked growth inhibition of Ca9-22 cells and apoptotic cells were also observed in vitro and in vivo. These findings suggest that local administration of cytotoxic agents with sonoporation is a useful method for molecular cancer therapy. このページのURI http://kaken.nii.ac.jp/ja/p/17390542 戻る
























